本生生物详解:一般来说,超滤的回收率可达90%以上。样本损失大多是由于滤膜表面和容器表面的非特异性吸附引起的。因此,选择口碑好、高品的浓缩离心管非常重要。Pall作为过滤方面的老牌公司,提供了多种浓缩离心管,可对50
μl到60
ml的样本进行高效的浓缩和脱盐。它配备了Omega(改良的聚醚砜)膜,确保低的非特异性吸附和高的回收率。当然,这个的前提是你选对了浓缩离心管。
如何选择浓缩离心管
1. 按体积
Pall提供了4个系列的浓缩离心管,适合处理不同体积的样本。你可以根据你的样本来选择。不过,如果样本浓度低体积大,可以选择较小容积的浓缩离心管多次重复加样离心。
产品
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样本体积
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Nanosep® 浓缩离心管
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< 0.5 mL
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Microsep™ Advance 浓缩离心管
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0.5-5.0 mL
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Macrosep® Advance 浓缩离心管
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5-20 mL
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Jumbosep™ 浓缩离心管
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20-60 mL
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2. 选择适当的截留分子(MWCO)
一旦样本体积确定,下一步就是选择适当的MWCO。对于蛋白而言,建议所选滤膜的MWCO是欲截留分子大小的1/6-1/3。通常,截留孔径越小,流速越慢,但截留比例更大。因此,如果流速是主要的考虑因素,建议选择MWCO为1/3的滤膜;如果重点考虑截留比例,那么好选择更致密的膜。
友情提示一下,超滤膜对分子的截留是由多个因素决定的。在截留分子之外,你还有必要考虑分子形状、电荷、样本浓度、样本组成及操作条件。也许,线性的DNA分子溜走了,而球状的分子却被保留下来。总之,根据下表来选择MWCO就基本没错了。为了防止大家拿错管子,Pall还贴心地将不同MWCO的浓缩离心管设置成不同的颜色,以方便识别。
核酸应用的MWCO选择
MWCO
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碱基对(双链)
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碱基(单链)
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3K
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16-32 bp
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32-65 bs
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5K
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25-50 bp
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50-95 bs
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10K
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50-145 bp
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95-285 bs
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30K
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145-285 bp
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285-570 bs
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50K
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240-475 bp
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475-950 bs
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100K
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475-1450 bp
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950-2900 bs
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300K
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1450-2900 bp
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2900-5700 bs
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1000K
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4800-9500 bp
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> 9500 bs
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蛋白应用的MWCO选择
MWCO
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膜额定的孔径大小
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生物分子的大小
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生物分子的分子
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3K
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-
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-
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10K-20K
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5K
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-
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-
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15K-30K
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10K
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-
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-
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30K-90K
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30K
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-
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-
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90K-180K
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50K
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5 nm
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15-30 nm
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150K-300K
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100K
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10 nm
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30-90 nm
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300K-900K
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300K
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35 nm
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90-200 nm
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900K-1800K
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1000K
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100 nm
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300-600 nm
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> 3000K
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浓缩离心管的应用
浓缩
这是大家都很熟悉的应用。超滤可很方便地浓缩经过稀释的蛋白或DNA/RNA样本。它很温和,不会打断长达100 kb的DNA,也不会导致蛋白酶活的损失,同时也很高效,回收率通常高于90%。
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