产品名称：FlashPfu DNA 聚合酶
英文名称：FlashPfu DNA Polymerase
产品规格：
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产品编号
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产品规格
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产品价格
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TK01123
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250U/管
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￥700
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TK01125
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500U/管
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￥1200
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产品描述：同科FlashPfu 高保真DNA 聚合酶通过融合特殊持进能力增强因子与精心改造过的pfu DNA聚合酶，是来源于超嗜热古细菌的DNA聚合酶。该酶具有5→3 聚合酶活力, 3→5 核酸外切酶活力，并产生平头末端产物。由于其具有高效的3→5 核酸外切酶活力（校正活力），使得PCR能获得很好的保真性，FlashPfu DNA聚合酶的错配率约为Taq DNA聚合酶的1/50。FlashPfu DNA聚合酶的快延伸速率可达5−6 kb/min，对于复杂模板也可达到2 kb/min。
特点与应用：
1、高保真PCR——保真性为Taq DNA聚合酶的50倍
2、快速PCR——延伸速度15−30 s/kb
3、长片段PCR——基因组DNA ≤ 19 kb，λ DNA ≤ 30kb
4、生成用于平头末端克隆的PCR产物
5、定点突变
活力单位定义：75°C、30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶，定义为1个活性单位（U）。
储存条件：储存于-20℃。
注意事项：
1、请等2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)完全溶解后再配制PCR反应体系。
2、为了获得的扩增效果，扩增前的所有操作请在冰上进行。在室温下，聚合酶活力可能会产生非特异性扩增。并且请将FlashPfu DNA Polymerase后加入反应体系，以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力导致引物降解。
3、本产品扩增产物的克隆请按照平头末端克隆方法操作。
4、引物设计：
1）引物Tm值计算请使用邻近法。请不要使用其他计算方法，它们计算得到的Tm值偏低，不适合本产品。
2）引物长度控制在20−35碱基，并且Tm > 60°C。
3）引物的GC含尽控制在40−60%。
4）在引物3’端以G或C结尾，可提高引物和模板结合效率。但是要避免3’端避免有多个G或C，防止非特异性结合。
5）正、反引物的Tm之差不要大于5°C。
6）正、反向引物的3’端避免相互互补。
7）扩增长片段时，引物长度控制在25−35碱基。
8）进行定点突变时，请将错配碱基靠近5’端。若错配碱基靠近3’端，可能会受本酶校正。
不要使用含有尿嘧啶和次黄嘌呤核苷的引物。
应用举例：对于复杂模板的极限延伸速度
步骤1. 按下表所示，在50 μl PCR体系中加入100 ng人基因组：
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成分
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体积
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终浓度
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2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)
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25 μl
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1×
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2.5 mM dNTP
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4 μl
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0.2 mM each
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10 μM Forward Primer
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2.5
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0.5 μM
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10 μM Reverse Primer
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2.5
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0.5 μM
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FlashPfu DNA Polymerase
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1.0 μl
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1 U
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Nuclease-free water
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To 50 μl
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100 ng/μl human genomic DNA
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1 μl
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100 ng/50 μl
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步骤2. 设置PCR程序：
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2步法
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步骤
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温度
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时间
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循环
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预变性
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98°C
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3 min
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1
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变性
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98°C
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10 sec
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30
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延伸
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72°C
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X min
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延伸时间:
X= 1 min (10 s/kb)
1.5 min (15 s/kb)
2 min (20 s/kb)
3 min (30 s/kb)
该案例中所用的引物：
6 kb β-globin target
FP: ACAAGGGCTACTGGTTGCCGATTTTTATTG
RP: GGGACTGGCCTCAGAGGAAACTTCAGG
案例结果电泳图：
同科生物简介：成立于2007年，是一家集研发、生产、销售和技术服务于一体注于生命医学和生物技术领域的高科技企。主营务有科研产品、诊断试剂、分子诊断和技术服务等，主要服务于科研机构、大院校、医院和工等客户。
生产科研：同科生物搭建多个研发与合作技术平台（博士后实践基地、院士工作站、同济大学人才培养与产学研合作基地及生物研究中心等），为技术创新提供了坚实的基础保障。拥有三类体外试剂生产中心、仪器生产中心、研发检实验室等、厂房和实验面积达8000多平米，仪器设备设施（包括定PCR仪、生物安全柜、核酸蛋白测定仪、高压细胞破碎仪、FPLC等系列高端精密仪器设备）。
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