复杂蛋白样品的高效分离是提高MS对蛋白鉴定覆盖度的重要因素。2D-Gel技术是依据蛋白等电点(iso-electric point)和分子的差异,通过等电聚焦(IEF)和SDS-PAGE的二维分离,不同性的蛋白以点状的形式(spot)分布在凝胶上;
样品通过2D-Gel分离后,每个点上的蛋白复杂度急剧降低。因此,凝胶上的蛋白酶解后,不需要再进行LC分离,可以直接进行MALDI-TOF MS分析,从而缩短实验周期和降低MS测试费用;
2D-Gel技术几乎兼容所以来源的蛋白样品(细胞、组织、体液等);
2D-Gel结合MALDI-TOF MS,主要用于差异蛋白组分析。
技术路线:
实验流程:
1.蛋白提取及定;
2.蛋白分别进行2D-Gel电泳及染色;
3.扫描图片,用软件对图像进行分析,寻找差异点;
4.切割差异点,Trypsin酶解,提取肽段,MALDI-TOF MS完成蛋白鉴定;
5.数据筛选,挑选蛋白进行验证(Western blot等)。
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