iTRAQ
背景简介:iTRAQ和TMT的技术原理完全一样,所不同的是二者的分子结构有差异。与SILAC相比(标记蛋白),iTRAQ和TMT是对肽段进行标记的。依据iTRAQ/TMT标签的数差异,通过MS实现对多组样品中的蛋白进行相对定:
SILAC是通过一级MS( MSl)对蛋白进行定,而iTRAQ/TMT是通过二级MS( MS/MS.MS2)进行定的;
iTRAQ/TMT几乎能兼容所有来源的蛋白样品,并且能同时分析多达8-10组的样品,分析通高。
试验流程
1、分别提取蛋白并定;
2、Trypsin分别对蛋白进行酶解,提取肽段;
3、用不同数的iTRAQ/TMT标签分别对肽段样品进行标记:
4、标记完成后,混合样品,用SCX进行组分分离(15-20组分);
5、对每个组分进行LC-MS分析:
6、蛋白鉴定与定分析,筛选差异表达的蛋白;
7、生物学实验验证(Western blot,EUSA等):
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